細胞凍存與復蘇的技術原理和操作步驟

細胞凍存與細胞復蘇，是細胞培養過程中的常見工作。細胞凍存，是指將細胞貯存在超低溫環境中，使細胞暫時“冬眠”的技術，在需要的時候再進行復蘇。細胞復蘇，是把凍存在-80℃冰箱或液氮中的細胞快速解凍，并使細胞重新恢復生長的技術。本文將為大家介紹細胞凍存與復蘇的技術要點和操作步驟。細胞凍存篇凍存原則細胞凍存原則為“慢凍”，即讓細胞在緩慢降溫的條件下逐漸冷凍。如果直接將細胞懸液放在超低溫下快速冷凍，細胞會受到冷凍損傷而死亡。在凍存液中添加的保護劑（如DMSO、甘油）和在凍存盒中添加的異...

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細胞長得慢、傳代不易貼壁，該怎么挽救？

各類細胞產品是我們做實驗研究的基礎，一支小小的細胞，關乎我們各種實驗的成功與否，細胞的”小事情“，在實驗中都是”大事情“，如果你的細胞出現生長緩慢、不貼壁等情況，那你可要注意了，這就是細胞狀態不好的信號，要及時“挽救”，不然很有可能細胞就瀕臨死亡。問題一：細胞生長緩慢細胞長得慢是細胞培養過程中比較常見的問題，一般來說，細胞活力和濃度一直是細胞健康的標志，細胞長得慢的話，活力和濃度可能都會直線下降。造成細胞生長緩慢的主要原因及解決方法：1，新配置的培養基以及換了新的血清，細胞不...

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Annexin V流式檢測細胞凋亡的數據分析方法

示例：細胞用FITC-AnnexinV/PI熒光雙染細胞凋亡檢測試劑盒檢測效果圖。Jurkat細胞用1μM喜樹堿(Camptothecin)(左)或未加藥(右)處理4h，FITC-AnnexinV/PI熒光雙染細胞凋亡檢測試劑盒染色后，流式細胞儀熒光檢測。AnnexinV-FITC單陽性細胞為早期凋亡細胞，AnnexinV-FITC和PI染色雙陽性的細胞為壞死細胞或者晚期凋亡。PI單染色陽性位裸核細胞。實測數據可能會因細胞類型、細胞凋亡情況，檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數...

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細胞傳代時間經驗技巧

養細胞的小伙伴們都知道，細胞一定要傳代，因為細胞在培養過程中不斷的繁殖，數量也隨之增加，然而培養皿/培養瓶的空間有限，增殖受到抑制，所以必須將一部分細胞移至別的培養皿/培養瓶，讓細胞有足夠生長空間。細胞傳代也不僅僅是為細胞安一個更大的“家”，更重要的，是使細胞系或細胞株進一步增殖，這樣，我們才能有足夠的細胞做各種各樣的實驗。但是，對于傳代的時間，很多小伙伴都掌握不好，因為對于不同的細胞來說，判斷能否開始傳代的標準略有不同，今天，我們就主要來聊一下，細胞傳代的時間問題。什么時候...

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如何避免胎牛血清沉淀物的產生

胎牛血清中可能出現的沉淀物是什么？①纖維蛋白，它是經常出現的較大的沉淀物，可以達到1-2mm，可以用肉眼觀察到。②磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現渾濁，并且在37℃培養的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經常被誤認為是微生物污染。③膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質，它們也是血清中出現沉淀物的常見原因。關于細胞生長，我們的試驗以及經驗表明沉淀物不會影響細胞培養，我們的客戶以及其它血清生產商也證明了這一點。那...

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細胞的凍存與復蘇

一、程序凍存步驟（需梯度降溫）1、配置凍存液，凍存液推薦配比：55%（基礎培養基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；推薦使用Procell通用血清型程序凍存液，貨號PB180436；2、制備好的細胞懸液計數，計算總細胞量；3、細胞離心后盡量吸干凈上清，離心轉速1200rpm（250g）3min；4、加入配置好的凍存液重懸，調整細胞濃度為3×106~1×107cells/mL；5、分裝入凍存管，一個凍存管分裝1~1.5毫升；6、推薦使用程序降溫...

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原代細胞的取材和分離方法

將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。原代細胞培養的步驟一般是：取材→分離→培養和維持，今天我們重點介紹原代細胞的取材和分離方法。一、取材人和動物細胞的取材是原代細胞培養成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養。取材的基本要求：①取材要注意新鮮和保鮮②應嚴格無菌③防止機械損傷④去除無用組織和避免干燥⑤應注意組織類型、分化程度、年齡等⑥作...

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原代細胞的復蘇步驟

細胞一般儲存在液氮中,溫度達196°C,理論上儲存時間是無限的。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以zuida限度的保存細胞活力。細胞復蘇就是要把原本冷凍保存(凍存)著的細胞恢復到一般的生長狀態,今天我們來看看原代細胞的復蘇步驟。一、檢查收到細胞株包裹時,請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請立即處理告訴寄方。細胞株請盡速開始培養,或立即冷凍保存(置于-70。C,隔夜后,移到iqN2)。二、冷凍細胞解凍1、依據細胞株說明書zhiding的基礎培養基種類、血清...

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