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細胞學堂 | A-498細胞知識盤點

更新時間:2023-12-26  |  點擊率:225
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A-498(人腎癌細胞)細胞由Aaronson·S建立,是從一名52歲女性腎癌患者的腎組織中分離出的具有上皮形態的細胞系。該細胞系是一種合適的轉染宿主,在腫瘤研究中具有一定的應用價值,常作為腎細胞癌研究的模型。





本期細胞學堂為大家整理了A-498細胞的培養條件與傳代、凍存步驟及常見應用,幫助您快速上手開展實驗。





細胞形態

A498細胞貼壁生長,呈上皮樣形態,細胞鋪開面積大,單位面積細胞總數量少,少量細胞有觸角;

低密度時可觀察到單個細胞清晰的邊緣,密度大于100%時邊緣不清晰,細胞與細胞之間沒有間隙;


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A-498細胞顯微鏡圖






培養方法

培養條件

MEM+10% FBS+1% P/S;

氣相:空氣,95%;二氧化碳:5%;

溫度:37℃;培養箱濕度:70%-80%;

生長特性

貼壁生長,上皮細胞樣;

倍增時間

33-36h;

凍存條件

凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮



A-498細胞的傳代

01

細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養;

02

棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次;

03

加1mL胰酶(含0.25% EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化2-3min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓、分離并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化;

04

3-4mL/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4min,棄去上清液,補加2-3mL培養液后吹勻;

05

收到細胞后首-次傳代推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新的已添加好新鮮培養基的皿中或者瓶中,傳代后每個T25培養液總體積是5-6mL,后續傳代根據實際情況按1:2到1:4的比例進行。

 注意事項 


A-498細胞鋪開面積大,單位面積細胞總數量少,需要合理控制傳代密度,建議細胞密度80%時,1:2-1:4傳代,2-3天換液或傳代一次;


A-498細胞的凍存

有血清程序凍存(需梯度降溫):

01

配置凍存液,凍存液推薦配比:55%(基礎培養基)+40%(血清)+5%(DMSO)或90%胎牛血清+10%DMSO;

02

制備好的細胞懸液計數,計算總細胞量;

03

細胞離心后盡量吸干凈上清,離心轉速1200rpm(250g)3min;

04

加入配置好的凍存液重懸,調整細胞濃度為3×106~1×107cells/mL;

05

分裝入凍存管,一個凍存管分裝1~1.5mL;

06

推薦使用程序降溫盒,分裝好的凍存管轉入程序降溫盒后直接放入-80℃冰箱過夜;

07

從-80℃冰箱取出凍存管迅速轉移到液氮長期保存。






常見應用

 A498細胞常作為腎細胞癌研究的模型

通過轉染調節特定信號通路,研究其對細胞增殖、侵襲的影響;

研究藥物對腎癌細胞進展的抑制作用,篩選腫瘤藥物;

通過A498在動物體內造模,模擬腎細胞癌細胞在體內行為,研究腎細胞癌生物學特性等。






參考文獻

[1]張悅,于學煒等.黃芪甲苷調節 miR-21 基因抑制腎癌細胞增殖和誘導細胞凋亡的機制探討[J].現代腫瘤醫學,2020,28(18):3145-3149

[2]Yan Sun,Liang Zhu,et al.ZDHHC2-Mediated AGK Palmitoylation Activates AKT–mTOR Signaling to Reduce Sunitinib Sensitivity in Renal Cell Carcinoma. Cancer Res (2023) 83 (12): 2034–2051.http-s://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-22-3105





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